簡單介紹下細(xì)胞爬片的使用步驟

發(fā)布日期： 2018-07-30

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　　簡單介紹下細(xì)胞爬片的使用步驟

　　細(xì)胞爬片步驟

　　(1)儲存液：1:10稀釋液可以保存在4℃里，三個月內(nèi)仍然可以使用。稀釋、儲存和吸取多聚賴氨酸要使用塑料制品。

　　工作液：0.1%(w/v)PLL，用移液槍吸取0.3ml PLL＋3ml無菌去離子水，混勻放于10ml無菌塑料離心管中。封口模密封后4℃存放。

　　(2)無菌處理：PLL不可以高溫消毒，故應(yīng)過濾除菌分裝于無菌處理的細(xì)胞凍存管內(nèi)，1ml/管，封口模密封，4℃保存。另外，準(zhǔn)備無菌去離子水50ml。

　　細(xì)胞爬片方法與技巧

　　爬片的準(zhǔn)備：

　　1、爬片可用一般的蓋玻片，也可用爬片；

　　2、應(yīng)用蓋玻片，可根據(jù)自己的需要剪裁成合適的大小，以備置于6孔板、12孔板或24孔板；

　　3、將剪裁好的爬片，置于濃硫酸中浸泡并過夜，第二天先用自來水沖洗20遍，再用三蒸水沖洗3遍（個人認(rèn)為主要目的是沖洗干凈就可以了），放在飯盒或者培養(yǎng)皿（一定是玻璃的哦，要不然就„„）中烘干后進(jìn)行高壓消毒。

　　培養(yǎng)板的準(zhǔn)備：

　　1、泡酸過夜

　　2、沖洗，烘干（1、2步驟與前大致相同）

　　3、放入超凈工作臺用紫外線照1～2小時就可以用了（在照之前可以將爬片一并放入，若細(xì)胞貼壁能力不強(qiáng)，可經(jīng)多聚賴氨酸浸片后放入。貼壁能力強(qiáng)的話，就可以省略了，進(jìn)行紫外線消毒）

　　注：此步自己的經(jīng)驗(yàn)是爬片可以先浸入消毒后的PBS內(nèi)，緊接著放入培養(yǎng)板內(nèi)。目的：

　　浸過PBS的爬片依靠表面的液體，可以用培養(yǎng)板孔底貼和緊密，以利于細(xì)胞長到爬片上。（自己剛開始做的時候，經(jīng)常就是細(xì)胞全都長在了爬片與培養(yǎng)板之間，爬片上細(xì)胞罕見。）

　　細(xì)胞爬片：

　　1、胰酶消化細(xì)胞后計數(shù)

　　2、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

　　3、第二天即可進(jìn)行干預(yù)措施

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